بهینه سازی تولید آنزیم استرپتوکیناز نوترکیب در باکتری اشریشا کلی

Authors

ندا مولایی

neda molaee dep. biology, faculty of basic sciences, sciences and research branch, islamic azad university, tehran, iranگروه زیست شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران حمید ابطحی

hamid abtahi molecular and medicine research center, arak university of medical sciences, arak, iranمرکز تحقیقات پزشکی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی اراک، ایران

abstract

زمینه و هدف: استرپتوکیناز از جمله پروتئین های ترشحی استرپتوکک پیوژن است. این پروتئین در بیماریزایی باکتری نقش مهمی دارد. در این تحقیق سعی بر تولید بالای این آنزیم به شکل نو ترکیب بوده به طوری که محصول با تغییر ترکیب محیط کشت و تعداد باکتری القاء شده افزایش یابد. مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی، با استفاده ازروش pcr، ژن استرپتوکیناز از استرپتوکوک پیوژن تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن در ناقل پلاسمیدی pet32a جهت بیان کلون گردید. سپس ساختار پلاسمیدی pet32a -ska وارد باکتری اشریشیاکلی سویه bl21- de3-plyss شد. تولید پروتئین با القاء توسط iptg و بهینه سازی شرایط محیط کشت و تعداد باکتری ها صورت گرفت. پروتئین نوترکیب با استفاده از کیت ni-nta خالص و میزان پروتئین با استفاده از روش برادفورد اندازه گیری شد. آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتئین نوترکیب انجام شد. یافته ها: ترادف نوکلئوتیدی ژن تکثیر شده با ژن استرپتوکیناز باکتری استرپتوکوک پیوژن یکسان بود. تولید پروتئین نوترکیب استرپتوکیناز با القاء پلاسمید pet32a -ska توسطiptg انجام گردید. پروتئین تولید شده از نظر آنتی ژنیسیته با فرم طبیعی یکسان بود. بیشترین مقدار پروتئین تولید شده در غلظت باکتری با جذب نوری 8/0 بود. در محیط فاقد گلوکز نسبت به محیط های گلوکز دار پروتئین بیشتری تولید شد. نتیجه گیری: تغییر شرایط محیط کشت می تواند باعث افزایش میزان تولید پروتئین های نوترکیب در باکتری میزبان گردد. وجود برخی عوامل غذایی از جمله گلوکز به تنهایی باعث افزایش محصول نمی شود بلکه امکان دارد کاهش محصول را نیز در پی داشته باشد.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

بیان استرپتوکیناز نوترکیب استرپتوکک گروهA در باکتری اشرشیاکلی

  زمینه: استرپتوکیناز A از جمله پروتئین­های ترشحی استرپتوکک پیوژن است که قدرت آنتی­ژنیک دارد . از این پروتئین می­توان جهت سیال کردن چرک در ذات­الریه و ورم مفصلی چرکی و همچنین به عنوان آنتی­ژن برای تشخیص عفونت­های استرپتوککی گروه A استفاده کرد.   هدف: مطالعه به منظور تولید استرپتوکیناز استرپتوکک گروه A نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی انجام شد.   مواد و روش­ها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختص...

full text

طراحی بیوانفورماتیکی و بهینه سازی تولید آنزیم گلوکزاکسیداز نوترکیب بیان شده در مخمر یارروویا لیپولیتیکا

سابقه و هدف: آنزیم گلوکزاکسیداز کاربرد فراوانی در صنایع پزشکی، دارویی، غذایی، نساجی و محیطی دارد. بیان هترولوگ این آنزیم در میزبان های مخمری به دلیل برخی از محدودیت های تولید صنعتی این آنزیم توسط آسپرژیلوس نایجر بررسی شده است. این مطالعه با هدف بررسی ویژگی های بیوانفورماتیکی گلوکزاکسیداز در سویه نوترکیب مخمر یارروویا لیپولیتیکا Po1g-GOX و بهینه سازی شرایط تولید این آنز...

full text

بهینه سازی شرایط کشت باکتری اشرشیا کولی برای اصلاح تولید قطعه C-D نوترکیب باکتریورودوپسین

در بررسی حاضر، بخش CDاز پروتئین باکتریورودوپسین (BR) در اشرشیاکولی نوترکیب بیان شد. ژن موتانت BRبا در نظر گرفتن کدون مورد استفاده در اشرشیاکولی ساخته شد. ژن ساخته شده در پلاسمید بیانی pET21a+ در محل ‌های برش Nde I وHind III کلون شده و تحت کنترل پیش‌بر T7</em...

full text

بیان استرپتوکیناز نوترکیب استرپتوکک گروهa در باکتری اشرشیاکلی

زمینه: استرپتوکیناز a از جمله پروتئین­های ترشحی استرپتوکک پیوژن است که قدرت آنتی­ژنیک دارد . از این پروتئین می­توان جهت سیال کردن چرک در ذات­الریه و ورم مفصلی چرکی و همچنین به عنوان آنتی­ژن برای تشخیص عفونت­های استرپتوککی گروه a استفاده کرد.   هدف: مطالعه به منظور تولید استرپتوکیناز استرپتوکک گروه a نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی انجام شد.   مواد و روش­ها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختصاص...

full text

بهینه سازی شرایط کشت یک سویه اشریشیا کلی با هدف تولید نیمه صنعتی آنزیم وارونوشتاز نوترکیب

وارونوشتاز مقاوم به دما (trt ) اهمیت زیادی جهت تولید cdna دارد. ژن trt با توانایی تولید این آنزیم، از باکتری geobacillus stearothermophilus strain10 استخراج و توسط حامل بیانی pet28-a در میزبان escherichie coli کلون شد و شرایط رشد این میزبان هترولوگ مورد بهینه سازی قرار گرفت. زیست توده ها جمع آوری شد.عصاره سلولی تهیه، آنزیم مورد نظر تخلیص و غلظت پروتئینی آن سنجیده شد. وارونوشتاز حاصل، جهت rt-pcr...

بهینه سازی تولید هورمون رشد نوترکیب انسانی در باکتری اشرشیاکلی

چکیده هورمون رشد انسانی یا سوماتوتروپین یک پروتئین تک رشته دارای 191 اسید آمینه به صورت یک ساختار با 4 هلیکس و دارای 2 پل دی سولفیدی و وزن مولکولی حدود 22 کیلودالتون می باشد. که توسط سلول های سوماتوتروف غده هیپوفیز ساخته شده و به جریان خون آزاد می شود. به علت فعالیت های بیولوژیکی مهم و متنوع هورمون رشد، این هورمون دارای کاربردهای گسترده ایی در پزشکی و بیوتکنولوژی می باشد. هورمون رشد به عنوان...

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی اراک

جلد ۱۴، شماره ۴، صفحات ۹۷-۱۰۳

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023